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    QuantumDesignChina

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    北京 朝阳区

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    医疗器械、实验室仪器 / 设备

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单细胞注射核心技术引领CHO克隆细胞系构建,效率提升超4倍!
CHO细胞(Chinese Hamster Ovary cells)是一种来自中国仓鼠卵巢的细胞系,与其他表达系统相比具有高蛋白产量、抵抗许多人类病毒感染、适合大规模工业培养等优势。早期研究表明,非糖基化版本的Avelumab(一种FDA批准的抗PD-L1抗体)在体内表现出增强的抗肿瘤活性。因此,创建一个敲除非人类糖基化途径相关基因的CHO细胞系具有非常高的商业利益。但在商业生产中为确保药品的同质性,监管机构要求CHO细胞必须是单细胞来源的。目前,单克隆细胞系的标准方法需要更长的时间线和费力的工作流程等问题。本文作者团队提出了基因编辑的创新方法,一种结合CRISPR/Cas9和多功能单细胞显微操作技术- FluidFM的单细胞核内纳米注射的方法,以解决当前转染方法的一些缺点。FluidFM技术保证了单克隆性的起源为单个细胞,而且避免了繁琐费时的有限稀释法、复杂的单细胞分选技术。此外,该方法兼容于在CHO细胞中开发单个敲除克隆或者多个敲除克隆(FUT8、BAX和DHFR)。对单个和多个敲除克隆的进一步分析证实了靶向基因破坏和蛋白质表达改变。敲除的CHO-K1克隆在随后的传代中表现出基因编辑的持久性,与无血清化学定义的培养基兼容,并表现出与亲本克隆相同的转基因表达。此外,FluidFM的力学控制特性避免了传统电穿孔后观察到的高细胞毒性,尤其是在难以转染的细胞系中也是有效的。

517 人阅读发布时间:2024-08-07 09:44

单细胞注射核心技术引领CHO克隆细胞系构建,效率提升超4倍!

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